Хемилюминесценция тромбоцитов. Использование метода хемилюминесценции для определения активности тромбоцитов

Об авторах:

Кривохижина Людмила Владимировна, заведующая кафедрой патофизиологии Южно-Уральского государственного медицинского университета, доктор медицинских наук
Кантюков Салават Абдулхакович, доцент кафедры биохимии Южно-Уральского государственного медицинского университета, кандидат медицинских наук

Ермолаева Елена Николаевна, доцент кафедры патофизиологии Южно-Уральского государственного медицинского университета, кандидат медицинских наук
Кривохижин Дмитрий Николаевич, заведующий отделением гнойной хирургии Городской клинической больницы № 1 г. Челябинска

Аннотация:

Тромбоциты как в интактном, так и в активированном состоянии способны генерировать активные формы кислорода (АФК). Доказано производство АФК тромбоцитами человека и крыс. Интенсивность генерации АФК можно зарегистрировать методом хемилюминесценции (ХЛ). Метод основан на добавлении в обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) люминола и регистрации хемилюминесценции на хемилюминомере ХЛ-003 с графическим отображением хемилюминограмм на компьютере. Добавление физиологического индуктора агрегации АДФ (аденозин дифосфата) в дозе, используемой для лабораторной оценки агрегации тромбоцитов, увеличивает свечение кровяных пластинок более чем в 2 раза. У крыс, вследствие особенностей их тромбоцитарной агрегации, при исследовании индуцированной ХЛ в пробу вместе с АДФ следует добавлять CaCl2 (1,0мМ). Таким образом, метод хемилюминесценции тромбоцитов позволяет оценить функциональное состояние интактных (ХЛ в присутствии только люминола) и активированных тромбоцитов (ХЛ в присутствии люминола и АДФ) по их способности продуцировать активные метаболиты кислорода.

Список литературы:

1. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2000. С. 226.

2. Bhatt, D.L., Topol, E.J. Scientific and clinical advances antiplatelet therapy // Nat.

Rev. Drug. Discov. 2003. T. 2. № 1. P. 15-28.

3. Offermanns, S. Activation of platelet function through G protein-coupled receptors

// Circ Res. 2006. T. 99. P. 1293–1304.

4. Gibbins, J.M. Platelet adhesion signaling and the regulation of thrombus formation

// J. Cell Sci. 2004. T. 117. P. 3415–3425.

5. Ozaki, Y., Asazuma, N., Suzuki-Inoue, K., Berndt, M.C. Platelet GPIb-IX-V-dependent

signaling // J. Thromb Haemostasis. 2005. Т. 3. Р. 1745–1751.

6. Jackson, S.P., Yap, C.L., Anderson, K.E. Phosphoinositide 3-kinases and the regulation

of platelet function // Biochem. Soc. Trans. 2004. T. 32. № 2. P. 387–392.

7. Rittenhouse, S.E. Phosphoinositide 3-kinase activation and platelet function // Blood.

1996. T. 88. P. 4401–4414.

8. Caughey, G.E., Cleland, L.G., Gamble, J.R., James, M.J. Up-regulation of endothelial

cyclooxygenase-2 and prostanoid synthesis by platelets // J. Biol. Chem. 2001. T. 276.

P. 37839–37845.

9. Krötz, F., Sohn, H.Y., Pohl, U. Reactive oxygen species—players in the platelet game

// Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. 2004. T. 24. P. 1988–1996.

10. Principe, D., Menichelli, A., Matteis, W. et all. Hydrogen peroxide is an intermediate

in the platelet activation cascade triggered by collagen, but not by thrombin // Thromb.

Res. 1991. T. 62. P. 365–375.

11. Владимиров Ю.А., Проскурнина Е.В. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция // Успехи биологической химии. 2009. Т. 49. С. 341-388.

12. Sobotkova, A., Masova-Chrastinova, L., Suttnar, J. et all. Antioxidants change platelet

responses to various stimulating events //Free Radic. Biol. Med. 2009. T. 47. № 12.

P. 1707–1714.

13. Фархутдинов Р.Р., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования

свободно-радикального окисления в биологии и медицине. Уфа, 1995. 90 с.

14. Monteiro, P.F., Morganti, R.P., Delbin, M.A. et all. Platelet hyperaggregability in

high-fat fed rats: A role for intraplatelet reactive-oxygen species production // Cardiovasc.

Diabetol. 2012. T. 11. P. 5.

15. Brass, L.F., Manning, D.R., Cichowski, K. et all. Signaling through G proteins in

platelets: to the integrins and beyond // Thromb. Haemost. 1997. T. 78. P. 581-589.

16. Jantzen, H.M., Gousset, L., Bhaskar, V. et all. Evidence for two distinct G-proteincoupled

ADP receptors mediating platelet activation // Thromb. Haemost. 1999. T. 81. P. 111-117.

16. Horn, E.H. et al. Longitudinal studies of platelet cyclic AMP during healthy pregnancy

and pregnancies at risk of pre-eclampsia // Clin. Sci. 1995. T. 89. P. 91–99.

18. Marcus, A.J., Silk, S.T., Safier, L.B. et all. Superoxide production and reducing activity

in human platelets // J. Clin Invest. 1977. T. 59. № 1. P. 149–158.

19. Handin, R.I., Karabin, R., Boxer, G.J. Enhancement of platelet function by superoxide

anion // J. Clin. Invest. 1977. T. 59. P. 959-965.

20. Arthur, J.F., Gardiner, E.E., Kenny, D. et all. Platelet receptor redox regulation //

Platelets. 2008. T.19. № 1. P. 1-8.